Edman降解（埃德曼降解）法，是由菲尔•埃德曼（Pehr Edman）首先创立用于肽链或蛋白质中N-端氨基酸序列分析的方法。Edman降解法检测的原理非常简单，在碱性条件下反应，用yìliúqíngsuānběnzhǐ（Phenylisothiocyanate, PITC）与待检测的蛋白质（多肽）的N-端氨基生成苯氨基硫甲酰（PTC）的衍生物，然后处理-关环-选择性切断肽链N-端，得到N-端氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接着用有机溶剂萃取衍生物，在酸的作用下，不稳定的衍生物转变为稳定的的乙内苯酰liúniào（PTH）衍生物，余下肽链中的酰胺键不受影响。通过用HPLC或电泳法分析生成的乙内酰苯liúniào氨基酸（PTH-氨基酸），可以鉴定出氨基酸类别。重复氨基酸鉴定反应可以达到对N端氨基酸按照从N端到C端的方向依次对氨基酸序列进行分析。对于序列较长的蛋白质（多肽），还可以将样品先切成小的肽段，先对肽段序列分析，再将肽段信息进行拼接即可获得完整蛋白质的序列信息。

蛋白质N端测序流程

Edman降解法用于N端测序的优点：

• PITC与所有氨基酸残基的反应产率和回收率高，因此副产物少，可通过色谱进行准确鉴定；
• 反应时间快，对于大多数氨基酸残基来说，30min耦合时间，5min切割反应时间即可；
• 反应后的肽链仍然是完整的，可用Edman降解法重复测定新生的N末端氨基酸。

Edman降解法用于N端测序需要注意的问题：

• 样品纯度需>90%，盐离子含量在50 mmol/L之内，不含SDS等变性剂，N端必须是均一的高纯样品；
• 10 Pmol 样品可以测定20 aa；
• 液体样品不能含有蛋白酶，建议尽早测试，防止时间太长容易降解；
• 转膜样品在转膜前不宜放置太久以防样品扩散，转膜后可密封保存3-6个月，建议使用Coomassie R-250进行染色，电泳缓存液建议使用CAPS buffer；
• 样品无信号峰是，建议蛋白进行N-端封闭；
• 建议整个反应过程中尽可能使用高纯buffer。

案例分析：

百泰派克生物科技采用岛津公司推出的PPSQ系列仪器实现对蛋白或者多肽样品N端氨基酸序列的分析，可以分析N端30个以上的氨基酸。以下是我们对某一蛋白药物进行分析的实际色谱结果，该项目对样品中蛋白药物的前15个氨基酸进行了分析。从下图（第15个氨基酸的色谱图）可以看出，色谱峰值仍然非常高，可以得到非常准确的结果。

中/英文项目报告

在技术报告中，百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告，报告包括：

• 实验步骤（中英文）
• 相关的质谱参数（中英文）
• 质谱图片
• 原始数据
• 生物药物N端序列信息

生物药物N端序列测定一站式服务

您只需下单-寄送样品

百泰派克一站式服务完成：样品处理-上机分析-数据分析-项目报告

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

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