NHS Magnetic Beads

保存：2~8℃保存，有效期1年。

产品说明：

Mag NHS 表面为NHS 基团修饰，能够与带有伯胺基团的蛋白和其他分子形成稳定的肽键，用于亲和纯化抗体、抗原和其他生物分子。与传统的羧基、氨基磁珠相比，表面含 NHS 基团的磁珠无需事先采用EDC/NHS或戊二醛进行活化，只需简单地将含伯氨基的生物配体溶解在试剂盒自带的Coupling Buffer中，室温下将蛋白与NHS 磁珠混合1~2 h 便可将生物配体共价偶联到磁珠上，具有操作简单、偶联条件温和、生物配体偶联快速高效等优点。磁珠偶联过程必需在不含任何氨基的缓冲溶剂中进行。人工操作时，使用磁性分离架实现磁珠与溶剂分离。也可采用自动化设备操作，自动化操作适合用于多样品的筛选。

产品信息：

1. 需准备的试剂

2. 磁珠基本信息

注1: 磁珠与配体的结合能力与生物配体的本身特性相关，此处仅做参考值。

注2: 1 mL 磁珠悬液中含有 200 µL 磁珠。

蛋白偶联操作流程及优化点

1.蛋白溶液的配制

2.磁珠的洗涤

3.蛋白偶联：（优化）

(1) Coupling Buffer的种类。首先通过实验确定最合适的Coupling Buffer

(2) 确定合适的Coupling Buffer后，再通过实验优化蛋白溶液的浓度

4.封闭

5.磁珠保存

6.注意事项：

(1) 其中磁珠洗涤要严格按照说明书采用冷却的Washing Buffer A快速洗涤，以防磁珠在洗涤过程中NHS基团水解；

(2) 蛋白偶联过程中， 首先要通过实验确定合适的Coupling Buffer（主要包括Coupling Buffer A、Coupling Buffer B、50 mM 硼酸溶液，pH 8.5、100 mM 磷酸缓冲液，100 mM NaCl，pH 7.4 这四种）；

(3) 确定合适的 Coupling Buffer 后，再以此 Coupling Buffer 为基础，确定合适的偶联蛋白浓度，因为蛋白浓度越高，偶联到磁珠上的蛋白的量会越大（这是由于NHS基团跟蛋白偶联和NHS 基团本身水解是一对竞争反应）。当然此处要综合考虑使用性能和成本，有些客户偶联少量的蛋白便可满足使用需求，这时采用低浓度的蛋白便可，这样可以降低成本。

(4) 封闭这一步可以采用试剂盒中自带的3 M乙醇胺，也可使用Tris 缓冲液（100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0），封闭时间不得低于2 h，如果化学封闭后背景仍然很高，还可以额外加一步 BSA 封闭。

蛋白偶联操作步骤

以下操作过程以取磁珠样品500 μL，采用1.5 mL EP 管为例介绍。用户可根据自身需求按比例调整：

1. 蛋白溶液配制：

取适量待偶联蛋白用 Coupling Buffer 溶解，配成浓度为≥3.0 mg/mL 的蛋白溶液。已经保存于 buffer 中的蛋白，需要通过透析或者脱盐的方法彻底除去原有 buffer 里含伯胺基的物质，然后再用 Coupling Buffer 配成浓度为≥3.0 mg/mL 的蛋白溶液，将