凝胶渗透色谱法（Gel Permeation Chromatography, GPC）是一种广泛用于测定高分子化合物分子量及其分布的分离技术。该方法基于分子在多孔填料中的渗透和排阻作用，通过分子体积大小差异实现分离。由于其高效、快速和稳定的特点，凝胶渗透色谱法测定分子量在聚合物科学、生物化学及相关领域中应用广泛。

一、原理与机制

凝胶渗透色谱法依赖于多孔填料基质对不同分子大小的选择性渗透。填料颗粒内部具有一系列孔径，样品分子在通过色谱柱时，根据其体积不同进入或排除不同大小的孔隙。大分子无法进入小孔隙，因而较早洗脱出柱，而小分子能进入更多的孔隙，洗脱时间较长。这样，样品分子按体积大小从大到小依次被洗脱。通过已知的标样分子量和对应的洗脱体积绘制校准曲线，可以从样品的洗脱体积推算其分子量。

二、方法步骤

1.样品制备：

将要分析的高分子样品溶解在适当的溶剂中，确保溶液中无未溶解颗粒和气泡，以免影响分离效果和检测精度。

2.色谱柱选择：

选择合适的填料和柱类型，通常填料材质包括聚苯乙烯-二乙烯基苯等，孔径范围的选择取决于样品分子量范围。

3.流动相选择：

在凝胶渗透色谱法测定分子量时，选择与样品和填料兼容的流动相，常用的有水相、有机相或其混合物，确保样品能够稳定通过色谱系统。

4.进样与分离：

将样品注入色谱柱，调节流速和温度以提高分离效果。样品在色谱柱中进行分子大小筛分。

5.检测与校准：

常用检测器包括示差折光检测器（RID）、紫外检测器（UV）以及多角度激光光散射（MALS）等。通过与已知分子量标准样品比较，校准仪器响应，建立分子量与洗脱体积的关系。

6.数据分析：

在凝胶渗透色谱法测定分子量的实验中，数据分析主要包含分子量的计算和分布分析。通常使用标定曲线法或绝对法进行分子量测定，标定曲线法通过已知分子量的标准样品建立关系曲线，而绝对法则依靠光散射等检测器直接测定。分子量分布则是通过分析洗脱谱图中不同分子量成分的比例来实现。分析结果通常以数均分子量（Mn）、重均分子量（Mw）和多分散指数（PDI）等参数来表示样品的分子量特征。

三、应用与挑战

凝胶渗透色谱法在合成聚合物、生物大分子如蛋白质、核酸等领域均有着广泛的应用。在高分子合成过程中，GPC能够有效监测聚合物的分子量变化及聚合过程的进展。然而，使用凝胶渗透色谱法测定分子量也存在一些局限性，如难以分析具有强极性或特殊结构的分子，以及在精确测定超高或超低分子量样品时可能面临挑战。针对这些问题，研究者们在不断完善检测技术和优化分析方法，以提高其适用性和准确度。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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