超氧阴离子含量检测试剂盒
品牌：Solarbio | 货号：BC1295
英文名称 : Micro Superoxide Anion Assay Kit
别名 : 超氧阴离子试剂盒 超氧阴离子测试盒
检测方法 : 微量法






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BC1295- 100管/96样
Solarbio
100管/96样
1710.00元
测定意义：
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。
测定原理：
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO2－在对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，根据A530值可以计算样品中O2－含量。
需要的仪器，耗材:
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸馏水。
操作步骤：
一．超氧阴离子提取 
1. 植物、动物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后，10000g，4℃，离心 20min，取上 清置于冰上待测。 
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建 议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 20min，取上清置于冰上待测。 
3. 血清或培养液：直接测定。
 
二、测定操作表 
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 530nm。
2、操作表
 
空白管
测定管
样本（μL）
 
40
提取液（μL）
100
60
试剂一(μL)
80
80
混匀，37℃水浴 20min
试剂二（μL）
60
60
试剂三（μL）
60
60
混匀，37℃水浴 20min
试剂四（μL）
100
100
混匀，8000rpm，25℃，离心 5min，小心吸取上层水相 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中， 空白管调零，测定 530nm 处吸光值，记为 A530。
 
三、超氧阴离子含量计算公式 
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线：y=0.0115x-0.0038，R 2 =0.9986
1. 组织： 
（1）按照样本质量计算 
超氧阴离子含量（μmol/g）= (A530+0.0038)÷0.0115×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3 ×2 = 1.74×(A530+0.0038)÷W 超氧阴离子产生速率（μmol/ g·min）=1.74×(A530+0.0038)÷W÷T =0.087×(A530+0.0038)÷W 
（2）按照蛋白质浓度计算 
超氧阴离子含量（μmol/mg prot）= (A530+0.0038)÷0.0115×V 反总÷(V 样×Cpr)×10-3 ×2 =1.74×(A530+0.0038)÷Cpr 超氧阴离子产生速率（μmol/ mg prot·min）=1.74×(A530+0.0038)÷Cpr÷T = 0.087×(A530+0.0038)÷Cpr 
2. 细菌，真菌： 
超氧阴离子含量（μmol/104 cell）= (A530+0.0038)÷0.0115× V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数 量)×10-3 ×2 = 1.74×(A530+0.0038)÷细胞数量 超氧阴离子产生速率（μmol/mg prot·min）= 1.74×(A530+0.0038)÷细胞数量÷T = 0.087×(A530+0.0038)÷细胞数量 
3. 血清或培养液 
超氧阴离子 含量（μmol/L）= (A530+0.0038)÷0.0115 × V 反总÷V 样×2= 1739.13×(A530+0.0038) 超氧阴离子产生速率（μmol/L·min）= 1739.13×(A530+0.0038) ÷T= 86.96×(A530+0.0038) V 样总：加入提取液体积，1 mL；
 V 反总：反应总体积，0.4mL；V 样：反应中样品体积， 0.04mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；2: 2 分子 O2 －参与反应生成 1 分子 NO2 －。 
 
相关文献：
《Decreasing fructose 1,6-bisphosphate aldolase activity reduces plant growth and tolerance to chilling stress in tomato seedlings》 作者:Bingbing Cai, Qiang Li, Fengjiao Liu, Huangai Bi and Xizhen Ai 期刊:Physiologia Plantarum 影响因子:3 PMID:29230823
《Comprehensive analysis of BpHSP genes and their expression under heat stresses in Betula platyphylla》 作者:Zhongyuan Liu,Peilong Wang,Tengqian Zhang,Yabo Li,Yuanyuan Wang,Caiqiu Gao 期刊:Environmental and Experimental Botany 影响因子:2.928 PMID:29336472